Composición química del acero inoxidable 347 La magnitud de las respuestas de las células T de la sangre venosa o capilar, específica del SARS-CoV-2, determina la inmunidad al COVID-19.

Gracias por visitar Nature.com.Está utilizando una versión del navegador con soporte CSS limitado.Para obtener la mejor experiencia, le recomendamos que utilice un navegador actualizado (o deshabilite el Modo de compatibilidad en Internet Explorer).Además, para garantizar un soporte continuo, mostramos el sitio sin estilos ni JavaScript.
Controles deslizantes que muestran tres artículos por diapositiva.Utilice los botones Atrás y Siguiente para moverse por las diapositivas, o los botones del controlador de diapositivas al final para moverse por cada diapositiva.

Composición química del acero inoxidable 347.

Composición química del tubo de bobina de acero inoxidable 347

La composición química y las propiedades mecánicas del tubo espiral de acero inoxidable 347 son las siguientes:
- Carbono – 0,030 % máx.
- Cromo – 17-19%
- Níquel – 8-10,5%
- Manganeso – 1% máx.

Propiedades mecánicas del tubo de bobina de acero inoxidable 347

Según el fabricante de tubos en espiral de acero inoxidable 347, propiedades mecánicas del tubo en espiral 347:
- Resistencia a la tracción (psi): 75.000 min
- Límite elástico (psi): 30.000 min.
- Alargamiento (% en 2″) – 25% min
- Dureza Brinell (BHN) – 170 máx.

Aplicaciones y usos del tubo espiral de acero inoxidable 347

• Tubo de bobina de acero inoxidable 347 utilizado en ingenios azucareros.
• Tubo de bobina de acero inoxidable 347 utilizado en fertilizantes.
• Tubo en espiral de acero inoxidable 347 utilizado en la industria.
• Tubo de bobina de acero inoxidable 347 utilizado en centrales eléctricas.
• Tubo de bobina de acero inoxidable 347 utilizado en alimentos y lácteos.
• Tubo de bobina de acero inoxidable 347 utilizado en plantas de petróleo y gas.
• Fabricante de tubos en espiral de acero inoxidable 347 utilizado en la industria de la construcción naval.

Se cree que las células T específicas del SARS-CoV-2 protegen contra la infección y la progresión de la COVID-19, pero no hay evidencia directa de ello.Aquí, comparamos las mediciones de sangre total de células T positivas para interferón γ específicas del SARS-CoV-2 con resultados positivos de las pruebas de diagnóstico de COVID-19 (PCR y/o flujo lateral) dentro de los 6 meses posteriores a la extracción de sangre de Lian.Entre 148 participantes que donaron muestras de sangre venosa, la magnitud de la respuesta de las células T específicas del SARS-CoV-2 fue significativamente mayor en aquellos que permanecieron protegidos que en aquellos que estaban infectados (P <0,0001).% de riesgo de infección, mientras que la alta intensidad redujo este riesgo al 5,4%.Estos resultados se generalizaron a 299 participantes adicionales que probaron un ensayo de sangre capilar escalable que podría facilitar el acceso a datos de inmunidad de células T a escala poblacional (14,9% frente a 4,4%).Por lo tanto, la medición de células T específicas para el SARS-CoV-2 puede predecir el riesgo de infección y debe evaluarse al monitorear el estado inmunológico individual y poblacional.
Medir y comprender la respuesta inmune a la infección por SARS-CoV-2 es importante para desarrollar estrategias futuras efectivas que minimicen los impactos económicos y de salud pública de futuros brotes de COVID-19.La identificación de correlatos inmunológicos proporcionará información importante sobre la susceptibilidad de una población a la infección viral, posiblemente una alerta temprana sobre el pico de hospitalizaciones, y también permitirá a las personas gestionar personalmente su riesgo de infección y el riesgo de infectar a otros.La vigilancia inmunológica ha demostrado ser fundamental para evaluar la eficacia de las vacunas contra la COVID-19 en pacientes sanos y de alto riesgo1,2,3 especialmente en mutantes del SARS-CoV-24, y la detección de personas inmunodeprimidas supondrá la necesidad de reforzar la inmunidad vacunarse y prevenir futuros brotes.
El nivel de inmunidad de un individuo a la infección por SARS-CoV-2 depende de múltiples factores: carga viral en el momento de la exposición, variantes del virus, edad, estado de vacunación/infección previa, comorbilidades, medicamentos y, lo más importante, infección anti-SARS-CoV. .2 la respuesta inmune adaptativa ocurre en el momento de la exposición al virus5.La evaluación de la respuesta inmune a la infección y/o vacunación por SARS-CoV-2 se ha centrado en ensayos serológicos que miden la presencia de anticuerpos específicos para una proteína estructural (p. ej., glicoproteína de pico).Sin embargo, la presencia o ausencia de anticuerpos por sí sola no determina con precisión una respuesta inmune protectora, ya que las respuestas se atenúan significativamente con el tiempo6 y la neutralización de las variantes del SARS-CoV-2 en individuos en recuperación o doblemente vacunados Actividad débil, que podría conducir a una gran número de infecciones irruptivas7.De hecho, la protección contra la COVID-19 sintomática causada por la variante Omicron (B.1.1.529) disminuyó a aproximadamente el 10 % después de solo 4 a 6 meses de vacunación con ARNm, aunque la protección contra la enfermedad grave persistió >68 % durante al menos 7 meses8.Medir las respuestas de las células T de memoria adaptativa, que confieren protección a largo plazo contra la infección viral, es el mejor indicador de susceptibilidad a la infección por SARS-CoV-2 y, por lo tanto, una mejor indicación del riesgo de dar positivo en una prueba de COVID-199, ya que las células T específicas Las células pueden prevenir la infección.sin seroconversión10,11.Sin embargo, la medición de las respuestas de las células T ha recibido menos atención debido a dificultades metodológicas y problemas logísticos en la obtención y transporte de muestras de sangre venosa, especialmente cuando se realizan grandes estudios observacionales para evaluar la eficacia de la vacuna y monitorear la inmunidad.Sin embargo, las personas vacunadas muestran una sólida actividad de las células T contra las variantes del SARS-CoV-2, lo que podría compensar la pérdida de reactividad de los anticuerpos para limitar la gravedad de la COVID-1912,13.
Aquí, buscamos comprender si una sola medición de la respuesta de las células T del SARS-CoV-2 podría predecir el riesgo absoluto de infección por SARS-CoV-2 dentro de los 6 meses posteriores al muestreo de sangre, independientemente de los factores previos que influyen en el sistema inmunológico.Para que la prueba de células T tenga un alto rendimiento y sea aplicable a estudios más amplios, también intentamos miniaturizar la prueba para que pueda realizarse utilizando una muestra de sangre capilar por punción digital.
Medimos las respuestas inmunitarias celulares y humorales en donantes sanos mediante una detección combinada de células T del SARS-CoV-2 y anticuerpos IgG basadas en sangre venosa completa (para conocer las características de los participantes, consulte el 14 de marzo de 2022. En donantes vacunados, el SARS-CoV-2- Las respuestas de células T específicas se determinaron midiendo los niveles plasmáticos de interferón-γ (IFN-γ) después de la estimulación en sangre total con el péptido SARS-CoV-2 (como anteriormente, refs. 14,15,16,17,18) y las respuestas de IgG asociadas. con nucleocápside (N) aumentaron en aquellos que informaron una infección previa, aunque ambas respuestas fueron mayores en donantes no vacunados previamente infectados, máximas en el cuerpo (Fig. 1a, b).Respuestas de IgG contra glicoproteínas de pico (RBD, S1, S2) fueron más altos en donantes vacunados previamente infectados (Figura 1c-e).
a Las respuestas de las células T IFN-γ+ específicas del SARS-CoV-2 se midieron mediante un ensayo de sangre entera venosa y se basaron en las vacunas de los participantes y el estado de infección previa por el SARS-CoV-2 (confirmado mediante PCR y/o prueba de flujo lateral)' Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 82 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 4 (amarillo), 'Vac-/Inf-' n = 1 (no aplicado).Las reacciones de unión de IgG específicas del SARS-CoV-2 se dirigen a la nucleocápside (“N”) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), dominio de unión al receptor (“RBD”) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), subunidad de pico 1 (“S1”) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) y el pico de la subunidad 2 (“S2”) (e) se midió mediante análisis de sangre venosa completa y se basó en la vacunación del participante y el SARS-CoV-2 previo (confirmado por PCR y/ o prueba de flujo lateral) estado infeccioso.'Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 4 (amarillo).Las comparaciones se realizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis, ajustada para comparaciones múltiples mediante la prueba de Dunn.Los datos se muestran en forma de gráficos (línea central en la mediana, límite superior en el percentil 75, límite inferior en el percentil 25) con bigotes en los valores mínimo y máximo.Cada punto representa un donante.Los datos sin procesar se proporcionan en forma de archivos de datos sin procesar.
Después de la toma de muestras de sangre, se pidió a los participantes que informaran por sí mismos los resultados positivos de la prueba de PCR y/o de flujo lateral para COVID-19;si los participantes dieron positivo entre el 1 de septiembre de 2021 y el 29 de diciembre de 2021, se supuso que estaban infectados con la variante del coronavirus Delta (B.1.617.2) y Omicron (B.1.1.529) a Public Health Wales después del 29 de diciembre de 2021, cuando esta opción de preocupación se vuelve dominante.Entre 148 donantes evaluables, observamos una tasa de infección del 26,3% (39/148) dentro de los 6 meses posteriores a la donación de sangre, 38 de los cuales recibieron una segunda o tercera dosis de la vacuna COVID-19 (el avance de la infección se produjo después de Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) vacuna de ARNm o vacuna de AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));un donante no vacunado también resultó infectado.La magnitud de las respuestas de las células T positivas para IFN-γ específicas del SARS-CoV-2 fue significativamente menor en aquellos que informaron una prueba de diagnóstico positiva para COVID-19 que en los donantes no infectados (P <0,0001; Fig. 2a), principalmente debido a inducción óptima de respuestas de células T mediante vacunación en algunos participantes (P = 0,050; Figura complementaria 1).No hubo correlación entre la magnitud de la respuesta de las células T IFN-γ+ y el tiempo transcurrido hasta un resultado positivo de la prueba COVID-19 (Figura 2 complementaria).Por el contrario, ni las respuestas de IgG de unión a RBD, S1, S2 (Figuras 2b-d) ni las respuestas de anticuerpos neutralizantes de RBD, S1 fueron específicas para el SARS-CoV-2 de tipo salvaje o delta (B.1.617).) (Figura complementaria 3) puede distinguir entre personas con riesgo de infección.Sin embargo, las respuestas bajas de IgG ligadas a N contra el SARS-CoV-2 se correlacionaron con el riesgo de infección por COVID-19 (P = 0,0084; Figura 2e);aquellos que dieron positivo tenían un 85% menos de probabilidades (P = 0,00035; OR 0,15, 95).% IC: 0,047–0,39 (Figura 4 complementaria).
Las muestras de sangre venosa de donantes sanos (n = 148) evaluaron las respuestas de las células T IFN-γ+ específicas del SARS-CoV-2 (a; ****P < 0,0001) y la unión del receptor Spike al SARS-CoV específico. -2 estímulo.dominio (“RBD”) (b), subunidad del pico 1 (“S1”) (c), subunidad del pico 2 (“S2”) (d) y nucleocápside (“N”) (e; **P = 0,0084) .Se identificaron los participantes que dieron positivo a COVID-19 (PCR y/o flujo lateral);todas las infecciones ocurrieron dentro de los 6 meses posteriores a la toma de muestra de sangre.Las comparaciones se realizaron mediante la prueba de Mann-Whitney de dos colas.Los datos se muestran en forma de gráficos (línea central en la mediana, límite superior en el percentil 75, límite inferior en el percentil 25) con bigotes en los valores mínimo y máximo.Cada punto representa un donante.ns no es importante.El mapa de calor f muestra las correlaciones de rango de Spearman entre variables para el conjunto de datos especificado.Las comparaciones que no fueron estadísticamente significativas se excluyeron de la matriz y se marcaron con celdas en blanco.Los datos sin procesar se proporcionan en forma de archivos de datos sin procesar.
El límite diagnóstico positivo preestablecido de 14 se consideró demasiado arbitrario para evaluar el riesgo de reinfección, por lo que se establecieron rangos intercuartílicos para establecer parámetros de riesgo absoluto.El modelo estadístico, que solo incluyó variables que tuvieron un efecto significativo en los resultados, mostró que la magnitud de la respuesta de las células T IFN-γ+ específicas del SARS-CoV-2 era el biomarcador inmunológico más importante para determinar las posibilidades de un individuo de ser probado para COVID.-19 positivo (Figura 2f y Figura complementaria 4).Pacientes con una respuesta de células T IFN-γ+ específica del SARS-CoV-2 en el tercer (194-489 pg/ml IFN-γ) y el cuarto (>489 pg/ml IFN-γ) cuartiles 65 % (P = 0,055; OR 0,35, IC del 95 %: 0,11–1,00) y el 90 % (P = 0,0050; OR 0,098, IC del 95 %: 0,014–0,42) tuvieron más participantes.Las posibilidades son escasas (Figura 4 complementaria).En general, los participantes con una respuesta de células T específica del SARS-CoV-2 a partir de sangre venosa ≤79 pg/ml de IFN-γ tuvieron un riesgo del 43,2 % de infección irruptiva a los 6 meses, en comparación con una respuesta >489 pg/ml.ml de IFN-γ tuvieron un riesgo de infección del 5,4% (tabla 2).
Las pruebas de sangre venosa total tienen un alcance limitado debido a la necesidad de que el flebotomista recolecte muestras.Para aumentar la disponibilidad de pruebas de células T e IgG para el SARS-CoV-2, se ha desarrollado un método alternativo de muestreo de sangre capilar para permitir a los participantes obtener muestras de sangre por punción digital en casa.Hasta donde sabemos, no ha habido informes previos sobre la medición de la función de las células T específicas de antígeno en muestras de sangre capilar.Anteriormente se ha demostrado una fuerte correlación entre los recuentos de linfocitos obtenidos utilizando muestras de sangre capilar y venosa comparables.Además, se ha informado que los ensayos basados ​​en sangre total que miden las respuestas de las células T específicas del SARS-CoV-2 utilizan solo 320 μL de sangre venosa,20 lo que elimina las preocupaciones sobre la frecuencia de las células T progenitoras en las muestras de sangre capilar.
Utilizamos este ensayo colaborativo estandarizado de alto rendimiento de células T del SARS-CoV-2 y anticuerpos IgG basado en sangre completa capilar para medir la respuesta inmune celular y humoral en participantes con diversas comorbilidades y estado previo de vacunación/infección (Tabla 1).reclutados en todo el Reino Unido entre el 24 de enero y el 14 de marzo de 202214. La mayoría (90,9%) de las muestras de dedos se obtuvieron correctamente y se enviaron al laboratorio dentro de las 24 horas posteriores a su recolección.En algunos casos, las muestras se recibieron dentro de las 48 horas posteriores a la extracción de sangre, pero ninguna de estas muestras pasó los controles de calidad y no afectó las mediciones generales de células T o anticuerpos (Figura complementaria 5).Aunque hubo diferencias en la magnitud de la respuesta de las células T IFN-γ+ específicas del SARS-CoV-2 medida en las respectivas muestras de sangre capilar y venosa en algunos individuos, no hubo diferencias significativas en general (P = 0,88; figura complementaria 6). ).).
Las respuestas de las células T IFN-γ+ específicas del SARS-CoV-2 aumentaron significativamente en individuos vacunados que también informaron una infección previa (P = 0,0001), pero no significativamente mayores que en individuos donantes no vacunados previamente infectados (P = 0,19, Fig. 3a).).Las respuestas de IgG contra la glicoproteína de pico (RBD, S1, S2) fueron significativamente mayores en los donantes vacunados que en los no vacunados, independientemente del estado de infección anterior (Figura 3b-d).Curiosamente, la respuesta media de IgG unida a N fue más alta en los participantes no vacunados previamente infectados en comparación con los participantes vacunados, aunque esto no alcanzó significación (Figura 3e).Entre los donantes no vacunados y no infectados que se auto declararon, 15 de 37 (40,5%) participantes dieron positivo para IgG ligada a N, por encima del umbral previamente establecido de 2,0 BAU/mL14;Estos 15 participantes Doce de estos pacientes dieron positivo en la respuesta de células T de IFN-γ+ por encima del umbral previamente establecido de 22,7 pg/ml de IFN-γ14.Por lo tanto, es probable que estos participantes estuvieran previamente infectados con SARS-CoV-2 y no se les hiciera la prueba de COVID-19 por elección personal, falta de PCR y/o equipo de flujo lateral, o fueran asintomáticos.Aunque hubo una correlación significativa entre las respuestas de las células T a los niveles de IFN-γ+ e IgG ligada a N en donantes no vacunados (P = 0,0044; Figura complementaria, la respuesta de IgG ligada a N disminuyó más rápido que la respuesta de IgG ligada a N, mientras que IFN-γ + Las respuestas de las células T se mantuvieron independientemente del estado de vacunación, aunque la cantidad de donantes a las 50 semanas posteriores a la exposición fue baja (Figura 8 complementaria). El tipo de vacunación fue generalmente poco diferente en las respuestas de IgG observadas específicas para SARS-CoV-2, T células y asociadas a RBD, aunque los participantes que recibieron dos dosis de BNT162b2 seguidas de la revacunación con mRNA1273 mostraron niveles significativamente más altos de células T IFN-γ + fueron más sensibles al SARS-CoV-2 que aquellos que recibieron dos dosis de ChAdOx1 y BNT162b2 (suplementario Fig. 9) Además, las comorbilidades informadas tuvieron poca diferencia general en las respuestas de células T observadas en comparación con los donantes sanos (Fig. 10 complementaria).
a Las respuestas de las células T IFN-γ+ específicas del SARS-CoV-2 se midieron mediante un ensayo de capilares de sangre total y se basaron en las vacunas de los participantes y el estado infeccioso previo del SARS-CoV-2 (confirmado mediante PCR y/o prueba de flujo lateral).'Vac + /Inf +' n = 42 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 158 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 33 (amarillo), 'Vac- /Inf-' n = 37 (gris).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- frente a Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ frente a Vac-/Inf-) P = 0,014 .Reacciones de unión de IgG específicas del SARS-CoV-2 al dominio de unión del receptor de pico (“RBD”) (b; ****P < 0,0001, ns: no significativo), subunidad 1 de pico (“S1”) (c; * * **P < 0,0001, ns: no significativo), subunidad de pico 2 (“S2”) (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) y nucleocápside (“N”) (e; ****P < 0,0001, ns no significativo) se midieron mediante análisis de sangre total venosa y en función de las vacunas de los participantes y del SARS-CoV-2 previo (confirmado mediante PCR y/o análisis de flujo lateral). Las infecciones se subdividieron por estado.'Vac + /Inf +' n = 46 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 182 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 34 (amarillo), 'Vac-/Inf-' n = 37 (gris).Las comparaciones se realizaron mediante la prueba de Kruskal-Wallis, ajustada para comparaciones múltiples mediante la prueba de Dunn.Los datos se muestran en forma de gráficos (línea central en la mediana, límite superior en el percentil 75, límite inferior en el percentil 25) con bigotes en los valores mínimo y máximo.Cada punto representa un donante.Los datos sin procesar se proporcionan en forma de archivos de datos sin procesar.
Como antes, se pidió a los participantes que informaran resultados positivos de PCR y/o flujo sanguíneo lateral para COVID-19;Según la Agencia de Salud del Reino Unido, se suponía que los participantes habían sido infectados con el coronavirus Omicron (B.1.1.529) en el momento de probar la variante del virus positiva, ya que era la variante dominante en el Reino Unido durante el período del estudio.Entre 299 donantes evaluables, observamos una tasa de infección del 8,0 % (24/299) dentro de los tres meses posteriores a la donación capilar, siete de los cuales no estaban vacunados.La proporción de comorbilidades entre todos los participantes fue menor en aquellos que dieron positivo para COVID-19 (10,7%) que en aquellos que dieron negativo para COVID-19 (24,4%, Tabla 1), lo que puede deberse al hecho de que los participantes con ciertas Las enfermedades son más cuidadosas y protegen contra posibles consecuencias como la diabetes y el cáncer.Como se observó en una cohorte de sangre venosa, las células T positivas para interferón-γ (IFN-γ) específicas del SARS-CoV-2 se midieron en muestras de sangre capilar de personas que informaron una prueba de diagnóstico positiva para COVID-19.La magnitud de la respuesta fue significativamente menor que en los donantes no infectados (P = 0,034; Figura 4a) debido a la inducción relativamente pobre de una respuesta de células T mediante vacunación y/o infección previa (Figura 11 complementaria).De manera similar, ni las respuestas de IgG de unión a RBD, S1, S2 (Figuras 4b-d) ni las respuestas de anticuerpos neutralizantes de RBD, S1 fueron específicas para el SARS-CoV-2 de tipo salvaje o delta (B. 1.617).(Figura complementaria 12).Se pueden identificar personas con un riesgo significativo de infección.A diferencia de la cohorte venosa, las respuestas de IgG relacionadas con N tampoco diferencian el riesgo de COVID-19 (Figura 4e), lo que sugiere que la variante Omicron (B.1.1.529) aumenta la evasión inmune en individuos previamente infectados, como se describió recientemente 21. Por el contrario, la fuerza de la respuesta de las células T IFN-γ específicas del SARS-CoV-2 fue nuevamente la variable más importante para determinar las probabilidades individuales de dar positivo en la prueba de COVID-19 (Figura 4f).En general, los participantes con una respuesta de células T capilares específicas del SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/ml de IFN-γ tenían un riesgo de infección del 14,9 % a los tres meses en comparación con una respuesta >141,6 pg/ml.ml de IFN.-γ tuvo un riesgo de infección del 4,4% (Tabla 2).
Respuestas de células T IFN-γ+ específicas para SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) y dominio de unión al receptor dirigido a IgG específico de SARS-CoV-2 (“RBD”) (b), subunidad de pico 1 (' S1 ′) (c), subunidad de pico 2 ('S2') (d) y reacción de unión a la nucleocápside ('N') (e).Los participantes identificados como positivos en las pruebas de COVID-19 (PCR y/o prueba de flujo sanguíneo lateral), todas las infecciones ocurrieron dentro de los 3 meses posteriores a la toma de muestra de sangre.Las comparaciones se realizaron mediante la prueba de Mann-Whitney de dos colas.Los datos se muestran en forma de gráficos (línea central en la mediana, límite superior en el percentil 75, límite inferior en el percentil 25) con bigotes en los valores mínimo y máximo.Cada punto representa un donante.ns no es importante.El mapa de calor f muestra las correlaciones de rango de Spearman entre variables para el conjunto de datos especificado.Las comparaciones que no fueron estadísticamente significativas se excluyeron de la matriz y se marcaron con celdas en blanco.Los datos sin procesar se proporcionan en forma de archivos de datos sin procesar.
A medida que avancemos hacia la siguiente fase de la pandemia de COVID-19, el enfoque pasará de la prevención a la gestión de riesgos individuales y la identificación de miembros vulnerables de la sociedad.Establecer correlatos de inmunidad al COVID-19 es fundamental para identificar y tratar eficazmente a estos grupos de alto riesgo.Cada vez hay más pruebas de que la inmunidad de las células T protege contra la infección por SARS-CoV-2 y limita la gravedad de la COVID-1910.Los datos presentados aquí demuestran que la fuerza combinada de las respuestas de las células T IFN-γ+ específicas del SARS-CoV-2 contra las proteínas estructurales de pico, membrana y nucleocápside confieren una mayor protección contra el COVID-19 que la unión de anticuerpos.19 promueven o neutralizan las respuestas .y debe tenerse en cuenta al evaluar la inmunidad individual y/o colectiva.Los virus de ARN como el SARS-CoV-2 o el virus de la influenza A (IAV) evitan la neutralización serológica al desarrollar rápidamente epítopos de células B expuestos en antígenos de superficie reconocidos por anticuerpos.La respuesta inmune protectora proporcionada por las células T puede reflejar la orientación de epítopos de regiones más conservadas de proteínas virales que no pueden escapar rápidamente a una respuesta inmune.La protección mediada por células T contra nuevas variantes del SARS-CoV-2 es similar a la protección heterosubtípica mediada por células T dirigidas a proteínas intrínsecas conservadas que se observa en los subtipos de IAV22,23.
A pesar del enorme potencial para medir la respuesta inmune celular a la COVID-19, se ha prestado relativamente poca atención al desarrollo de ensayos de células T estandarizados, precisos y de alto rendimiento.Las complejidades y costos tradicionales asociados con la medición de las respuestas de las células T impiden la determinación precisa de la inmunidad de las células T cuando se analiza la inmunidad de una gran población.Si bien recientemente han estado disponibles varios ensayos comerciales de estimulación de péptidos en sangre total, actualmente todo el mundo requiere un flebotomista para obtener sangre, lo que limita la disponibilidad y la escala.Los sistemas de sangre capilar se utilizan ampliamente para determinar la prevalencia de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 en una población.Adaptamos ensayos de sangre capilar para realizar ensayos de estimulación de péptidos en sangre total para evaluar la reactividad de las células T a las proteínas estructurales del SARS-CoV-2 y las respuestas de anticuerpos específicos del SARS-CoV-2.De hecho, la medición combinada de anticuerpos específicos del SARS-CoV-2 y células T en la misma muestra de sangre capilar es muy atractiva: (i) reduce la necesidad de múltiples análisis de sangre por participante, (ii) mejora la experiencia y la comprensión de los participantes;(iii) mejorar la logística y reducir la duplicación, (iv) reducir el impacto ambiental ya que se requieren menos consumibles de laboratorio y entrega de muestras.Aunque la reactividad general del IFN-γ fue similar entre las muestras de sangre venosa y capilar emparejadas, se observó que era menor en la cohorte de participantes de sangre capilar (Fig. 4a) en comparación con la cohorte de sangre venosa (Fig. 2a).Valores de IFN-γ Hay varias explicaciones para este hallazgo, a saber, un gran número de participantes con comorbilidades que requerían terapia inmunosupresora fueron reclutados en la cohorte de muestreo de sangre capilar (Tabla 1) y Viabilidad y/o función de las células T obtenidas de células T vasculares. Las muestras pueden ser bajas, especialmente teniendo en cuenta las condiciones de almacenamiento a largo plazo de las muestras antes de la estimulación con péptidos.
La vacuna contra la COVID-19, actualmente ampliamente disponible, proporciona la mejor protección contra enfermedades graves para la mayoría de los receptores dentro de los 6 meses posteriores a la vacunación8.Es alentador que, a pesar de la deficiente neutralización serológica de las variantes del SARS-CoV-26,7 inducida por la vacuna, las respuestas de las células T provocadas por la vacunación contra el SARS-CoV-2 de tipo salvaje siguieron siendo altamente reactivas, ya que surgieron otras 25.Los datos que presentamos aquí demuestran la importancia de una evaluación más amplia de la inmunogenicidad de la vacuna, destacando las vacunas con inmunidad de células T insuficiente para prevenir la infección repentina y la transmisión persistente del virus.También observamos que muchos individuos no vacunados reclutados en la cohorte capilar tuvieron una respuesta significativa de células T específicas del SARS-CoV-2 (e IgG de unión a N) independientemente de la vacunación previa, lo que probablemente se deba a una infección previa.En lugar de vacunar a las personas adecuadas, se debe evaluar su riesgo de infección en función de su estado de vacunación actual y de las decisiones informadas tomadas.
Las limitaciones de este estudio incluyen la seguridad de que los participantes informaron sobre la infección por SARS-CoV-2 después de la extracción de sangre para determinar la relevancia de la inmunidad;algunos participantes pueden tener una infección asintomática y no pueden someterse a una prueba de PCR y/o de flujo lateral para COVID-19.Nuestro conjunto de datos también carecía de información sobre los medicamentos de los participantes en el momento de la toma de muestras de sangre.Además, dado que todos nuestros participantes informaron solo síntomas leves/moderados o ningún síntoma, no fue posible identificar respuestas inmunes de nuestro conjunto de datos que predijeran un mayor riesgo de enfermedad grave y hospitalización por COVID-19.Sin embargo, la presencia de respuestas de células T CD8+ contra epítopos específicos de la nucleocápside se ha asociado recientemente con la protección contra la COVID-1926 grave.Además, el ensayo utilizado aquí no midió las respuestas de las células T a proteínas no estructurales expresadas tempranamente del SARS-CoV-2 que recientemente se ha demostrado que se acumulan preferentemente en trabajadores de la salud seronegativos que han estado en contacto con pacientes infectados.Según este trabajo, dada la prevalencia de la transmisión comunitaria en el momento del reclutamiento y la alta probabilidad de infección por contacto en la población, la cantidad de células T específicas del SARS-CoV-2 encontradas en nuestras pruebas también parece ser capaz de eliminarse.Infecciones subclínicas en nuestras cohortes.Finalmente, no medimos la producción de interleucina 2 por parte de las células T porque nuestro trabajo anterior demostró una identificación deficiente de las respuestas de las células T específicas del SARS-CoV-214, aunque las respuestas específicas de la IL-2 pueden indicar una reactividad cruzada preexistente.células asociadas con la defensa contra la infección por SARS-CoV-211.
En conjunto, estos datos resaltan la necesidad fundamental de estudios longitudinales a largo plazo que incorporen las respuestas de las células T específicas del SARS-CoV-2 en medidas de inmunidad a escala poblacional.Estos esfuerzos pueden verse favorecidos por el desarrollo de un nuevo análisis de sangre capilar que mida la respuesta de las células T.
El proyecto de investigación reclutó participantes desde febrero de 2021 hasta marzo de 2022. La cohorte de donantes sanos (n = 148) que donaron muestras de sangre venosa estuvo compuesta principalmente por personal universitario y estudiantes que participaban en el servicio de detección de COVID-19 de la Universidad de Cardiff o personal de una escuela primaria en Cardiff.Por lo demás, todos los participantes estaban sanos y no informaron haber tomado ningún fármaco inmunosupresor (consulte la Tabla 1 para conocer las características).La cohorte de participantes que donaron muestras de sangre capilar incluyó a todos los donantes voluntarios (mayores de 18 años) de todo el Reino Unido.Entre el 24 de enero y el 14 de marzo de 2022, se inscribieron en el estudio 342 participantes, de los cuales 299 enviaron muestras de sangre al laboratorio.Muchos participantes permanecieron sin vacunar y/o informaron comorbilidades graves, incluidas enfermedades autoinmunes y cáncer (consulte la Tabla 1 para conocer las características).Este estudio recibió la aprobación ética del Comité de Ética de Investigación de Newcastle y North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) y del Comité de Ética de Investigación de la Facultad de Medicina de la Universidad de Cardiff (SREC ref: SMREC 21/01).Todos los participantes dieron su consentimiento informado por escrito antes de la inclusión.Los participantes no recibieron ninguna compensación por participar en este estudio.
Las muestras de sangre venosa se obtuvieron mediante punción venosa en vacutainers (BD) de heparina de litio o sodio de 6 o 10 ml.Se obtuvieron muestras de sangre capilar con una lanceta para el dedo y luego se recogieron en microcontenedores de heparina (BD).Se requiere un mínimo de 400 µl de sangre;cualquier muestra inferior a esta cantidad será rechazada.Otras razones para el rechazo de la muestra incluyeron coagulación masiva y/o hemólisis y la imposibilidad de recolectar plasma viscoso para el análisis (Figura complementaria 5).Un total de 299 muestras de sangre capilar estaban disponibles para evaluar las respuestas de los anticuerpos, de las cuales 270 muestras también estaban disponibles para evaluar las respuestas de las células T.
Las respuestas de las células T específicas del SARS-CoV-2 se evaluaron mediante el ensayo COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) y se realizaron como se describió anteriormente14.Brevemente, se tomó de cada participante un vacutainer venoso de heparina sódica (BD) de 6 ml o 10 ml y se procesó en el laboratorio dentro de las 12 horas posteriores a la extracción de sangre.Aunque la mayoría de las muestras se procesaron dentro de las 24 horas, se recogieron 400 a 600 μl de sangre capilar microsangrado (BD) heparinizada dentro de las 48 horas posteriores a la toma de muestra por punción digital.Se estimularon muestras de sangre venosa y/o capilar con grupos de péptidos separados específicos para el SARS-CoV-2 (variante de tipo salvaje) como se describió anteriormente14.Esta biblioteca de péptidos contiene 420 secuencias de 15 unidades con 11 aminoácidos superpuestos que abarcan toda la proteína de pico (S1 y S2) (S; proteína NCBI: QHD43416 1), fosfoproteína de la nucleocápside (NP; proteína NCBI: QHD43423 2) y glicoproteína de membrana (M ; proteína NCBI: QHD43419 1) secuencias codificantes (denominadas “biblioteca de péptidos combinatorios S-/NP-/M”).Todos los péptidos se purificaron a >70 %, se disolvieron en agua esterilizada y se usaron a una concentración final de 0,5 µg/ml por péptido.Las muestras se incubaron a 37°C durante 20 a 24 horas.Luego, los tubos se centrifugaron a 5000 xg durante 3 minutos y se recogieron ~150 µl de plasma de la parte superior de cada muestra de sangre.Almacene las muestras de plasma a -20 °C durante hasta un mes antes de realizar ensayos de detección de citoquinas/anticuerpos.
El IFN-γ se midió utilizando el IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, número de catálogo 430116) y se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante.Inmediatamente después de añadir la solución de parada (H2SO4 2 N), la microplaca se leyó a 450 nm utilizando un lector de placas BioLegend Mini ELISA.El IFN-γ se cuantificó mediante extrapolación de curva estándar utilizando GraphPad Prism.Los valores por debajo del límite de detección inferior del ensayo se registraron como 7,8 pg/ml, los valores por encima del límite de detección superior del ensayo se registraron como 1000 pg/ml.
Los anticuerpos IgG anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N se midieron utilizando un panel Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 de 4 plex (Bio-Rad, n.º de cat. 12014634) y se etiquetaron de acuerdo con Instrucciones del fabricante .instrucciones .Las muestras que presentaban valores superiores al límite de cuantificación se volvieron a analizar con una dilución de 1:1000.La intensidad de fluorescencia promedio de las perlas se midió en un instrumento Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Las concentraciones de anticuerpos se calcularon mediante el ensayo de control único VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) y se convirtieron a unidades estándar de referencia internacional (BAU/mL) OMS/NIBSC 20/136 utilizando el factor de calibración del fabricante.
Los anticuerpos neutralizantes específicos de las subunidades RBD y S1 contra las líneas de SARS-CoV-2 de tipo salvaje y delta (B.1.617) del SARS-CoV-2 se midieron utilizando el kit de anticuerpos de neutralización variante del SARS-CoV-2 humano Bio-Plex Pro (Bio -Rad , ref. 12016897), según las instrucciones del fabricante.Mida la intensidad de fluorescencia promedio en Bio-Plex 200 (Bio-Rad) y calcule el porcentaje de inhibición (es decir, neutralización) usando la siguiente fórmula:
Los ensayos de neutralización infecciosa para el SARS-CoV-2 se realizaron como se describió anteriormente28.Brevemente, se incubaron 600 UFP de SARS-CoV-2 de tipo salvaje con diluciones seriadas de plasma triples por duplicado durante 1 hora a 37 °C.Luego se añadió la mezcla a células VeroE6 durante 48 horas.Las monocapas se fijaron con paraformaldehído al 4%, se permeabilizaron con NP-40 al 0,5% y se incubaron durante 1 hora en tampón de bloqueo (PBS que contenía tween al 0,1% y leche desnatada al 3%).Se añadió anticuerpo primario (antinucleocápside 1C7, Stratech) al tampón de bloqueo durante 1 hora a temperatura ambiente.Después del lavado, se añadió un anticuerpo secundario (IgG anti-ratón-HRP, Pierce) al tampón de bloqueo durante 1 hora.Las monocapas se lavaron, se revelaron usando Sigmafast OPD y se leyeron en un lector de placas Clariostar Omega.En cada experimento se incluyeron como controles pocillos sin virus, sin virus pero sin anticuerpos, y sueros normalizados que mostraban actividad intermedia.
El análisis estadístico se realizó en GraphPad Prism (versión 9.4.1).La normalidad del conjunto de datos se probó mediante la prueba de Shapiro-Wilk.Se utilizaron criterios no paramétricos para todas las comparaciones.Para muestras no apareadas se utilizó la prueba de Mann-Whitney.Todas las pruebas fueron bilaterales con un umbral de significación nominal de P ≤ 0,05.
El análisis exploratorio inicial del conjunto de datos se realizó en R (versión 4.0.3).Esto incluye el desarrollo de la matriz de correlación de rangos univariados de Spearman, donde la correlación entre dos variables está representada por el tamaño y el color de los cuadrados.La significación estadística entre asociaciones se calculó mediante rho de Spearman, donde se consideraron significativos valores ≤0,05.Las comparaciones que no fueron estadísticamente significativas se excluyeron de la matriz y se marcaron con celdas en blanco.Los valores de p se ajustaron para comparaciones múltiples utilizando la corrección de Holm.Se utilizó un modelo de regresión logística binaria para simular el efecto de las variables del conjunto de datos sobre la respuesta positiva al COVID-19.Las respuestas de las células T de IFN-γ y las puntuaciones de los títulos de IgG anti-RBD/S1/S2/N se convirtieron en factores, donde cada individuo fue asignado al cuartil apropiado para cada puntuación.Posteriormente, se desarrolló un modelo de investigación inicial utilizando la función glm en el paquete estadístico (V4.0.3).Los odds ratios derivados de este modelo original se extrajeron de los coeficientes del modelo utilizando la función 'odds_plot' en el paquete OddsPlotty (V1.0.2).Al desarrollar el modelo de validación cruzada, utilizamos la función "bestglm" del paquete bestglm (V0.37.3) para limitar el sesgo del usuario y garantizar que se pueda seleccionar el mejor subconjunto de predictores.El método elegido fue “exhaustivo” y el criterio de información utilizado para evaluar el ajuste del modelo fue AIC.Se utilizó el mismo flujo de trabajo descrito anteriormente para obtener el odds ratio.
Para obtener más información sobre el diseño del estudio, consulte el resumen del estudio de Nature vinculado a este artículo.
Las cartas y solicitudes de materiales deben dirigirse al Dr. Martin Scarr o al Profesor Andrew Godkin.Este artículo proporciona los datos originales.
El código R utilizado para crear modelos estadísticos está disponible públicamente sin necesidad de solicitud29.La información de reimpresión y las licencias se pueden encontrar en www.nature.com/reprints.
Munro, APS y cols.Seguridad e inmunogenicidad de siete vacunas COVID-19 como tercera dosis (refuerzo) después de dos dosis de ChAdOx1 nCov-19 o BNT162b2 (COV-BOOST) en el Reino Unido: un ensayo de fase 2, ciego, multicéntrico, aleatorizado y controlado.Lanceta 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV y cols.Inmunogenicidad, seguridad y reactogenicidad de la vacunación primaria heteróloga contra COVID-19 (Com-COV2) utilizando ARNm, vectores virales y vacunas con adyuvantes proteicos en el Reino Unido: un ensayo de fase 2, aleatorizado, simple ciego, prueba de no inferioridad.Lanceta 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB y cols.Eficacia de las vacunas COVID-19 en pacientes inmunodeprimidos: una revisión sistemática y un metanálisis.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Disminución de la neutralización de la variante B.1.1.529 de micras del SARS-CoV-2 por el suero después de la inmunización.Lanceta 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y y Baliser RD Infección irruptiva en personas vacunadas contra el SARS-CoV-2: medición, causas y consecuencias.Sacerdote Nacional de Inmunología.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG y cols.Respuesta humoral inmune debilitada a la vacuna BNT162b2 Covid-19 durante 6 meses.N. ing.J. Medicina.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Actividad de sueros de convalecientes y vacunales frente al SARS-CoV-2 Omicron.Naturaleza 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. y col.Duración de la protección de la vacuna de ARNm de Qatar contra las subvariantes Omicron BA.1 y BA.2 del SARS-CoV-2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ y cols.La frecuencia de las células B de memoria disminuye con la infección irruptiva de la vacuna delta COVID-19.Medicina Molecular EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. y col.Las células T de memoria de reacción cruzada están asociadas con la protección de los contactos de COVID-19 de la infección por SARS-CoV-2.Comuna nacional.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Respuestas distintivas de células T y células B reactivas a ómicrones del SARS CoV-2 en receptores de la vacuna COVID-19.la ciencia.Inmunología.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Las células T heredadas específicas del SARS-CoV-2 reconocen de forma cruzada variantes de Omicron.Medicina nacional.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ y cols.La medición de células T específicas del SARS-CoV-2 en sangre total revela infección asintomática e inmunogenicidad de la vacuna en individuos sanos y pacientes con cáncer de órgano sólido Inmunología https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT y cols.Medición rápida de células T de pico de SARS-CoV-2 en sangre total de personas vacunadas e infectadas de forma natural.J. Clínica.invertir.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, UE et al.Respuesta a la vacuna COVID-19 en pacientes con esclerosis múltiple.instalar.Neuronas.91, 89-100 (2022).
Bradley RE y cols.La infección persistente por COVID-19 con síndrome de Wiskott-Aldrich desapareció después de la vacunación terapéutica: reporte de un caso.J. Clínica.Inmunología.42, 32–35 (2022).